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本发明公开了一种象耳豆根结线虫单根结的检测方法与应用。本发明设计了扩增根结线虫的通用引物MF、MR和扩增象耳豆根结线虫的特异性引物FMe和RMe，以含有根结线虫的单根结DNA为模板进行PCR扩增反应；将PCR扩增反应产物进行脂糖电泳检测，根据条带有无和大小方面地获得检测结果；所述引物的序列分别如表SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。本发明一步双重PCR的检测方法在提高分子检测速度和灵敏度的同时且准确，在象耳豆根结线虫检测方面具有很高的实际应用价值。