本发明公开了双组分原位注射型聚天冬酰胺仿生组织粘合剂及其制备方法。该组织粘合剂由两种分别带有不同的反应性官能团的聚天冬酰胺组分一溶液和组分二溶液组成，组分一为带有乙烯基、邻苯二酚和羟基官能团的聚天冬酰胺，组分二为带有巯基、邻苯二酚和羟基官能团的聚天冬酰胺；组分一的溶剂为过氧化氢溶液；组分二的溶剂为辣根过氧化物酶溶液。组分一和组分二中的邻苯二酚官能团具有仿海洋生物贻贝的粘附特性，能够与组织表面发生非共价相互作用，使粘合剂具备组织粘附性，从而实现组织修复。本发明组织粘合剂具有优异的组织粘合强度和使用便利性，对手术缝合线的替代以及伤口愈合具有重要意义。